病毒纯化,即应用各种物理、化学方法,以不使病毒受损伤和失活为前提,去除宿主细胞组分等非病毒杂质,提取出高纯度浓缩的病毒样品。病毒提纯是病毒学研究 的重要前提,病毒微细形态结构的研究、病毒抗原蛋白的分离提纯、病毒化学成分及其遗传物质--DNA或RNA的详细研究都需要高纯度的病毒样品。病毒纯度 只是一个相对的概念,很难有绝对的标准,通常以下几点可以作为判定依据。
物理均一性:测定病毒样品的物理均一性,是证明其纯度的常用方法,包括电镜检查、病毒粒子沉降系数和扩散常数及其在凝胶电泳、等电聚焦中的迁移率等。
病毒滴度与蛋白含量的比例:测定病毒材料的感染力或其血清学反应。滴度与其蛋白含量的比例,也是一种通常采用的纯度测定方法。病毒滴度对蛋白含量的比例越高,说明病毒的纯度越高。
免疫学反应:免疫反应单一而无非特异反应,则说明病毒材料比较纯净。
结晶形成:病毒粒子在十分纯净的情况下,经常可以形成结晶,但少数混有杂质的病毒样品亦可形成结晶,所以这也只是一个相对标准。
病毒纯化方法
目前广大科研工作者纯化病毒通常采用超速离心法,其中平衡梯度密度离心是用超速离心机对小分子物质溶液,长时间加一个离心力场达到沉降平衡,在沉降池内从液面到底部出现一定的密度梯度。若在该溶液里加入少量大分子溶液,则溶液内比溶剂密度大的部分就产生大分子沉降,比溶剂密度小的部分就会上浮,最后在重力和浮力平衡的位置,集聚形成大分子带状物。因为病毒颗粒跟其它生物分子大小不一样,所以病毒在梯度离心过程中形成独特的条带,从而达到分离纯化的效果。
但是此类方法对仪器的要求很高,要求离心机能够达到超速,至少要能达到30000 rpm,在这个转速下要求离心时间7-8小时!
如今市面上许多公司开发出各种亲和树脂,能有效地吸附病毒离子,从而达到病毒纯化的目的。Biomiga公司所开发的病毒纯化系列试剂盒,采用新型材料, 能有效吸附腺病毒、腺相关病毒、慢病毒等,加入适当浓度的离子溶液将病毒离子解离回收,最后对病毒进行脱盐处理,所得病毒纯度高。整个操作简便,极大地缩 短了纯化时间,针对需要纯化大量病毒的客户提供大量提取试剂盒,满足客户不同需要!
![](/upload/201605/09/201605091446149942.jpg)