抗体稀释液？

      即用于稀释抗体的溶液。在抗原抗反应的实验中，需用已经制备的抗体检测样本中的抗原，但抗体试剂的浓度很高，需要稀释合适的倍数后才可以用于检测抗原。

抗体稀释液的作用?

       一、缓冲体系，为抗体提供稳定的工作环境（离子浓度，pH等）；

     二、保护体系，长时间保持抗体稳定，防止抗体在低浓度下效价降低；

     三、封闭体系，辅助提高抗体特异性，减少非特异结合。

     注意事项：抗体稀释的浓度依据自己的实验自己摸索的，不同实验中，不同抗体稀释倍数不同。

常用的抗体稀释液 

     1、脱脂奶粉

     优点：量多便宜，脂肪含量低，蛋白含量高。配制成0.3~5%的水溶液使用。

     缺点：容易发霉变质，每次使用，需要更改新的抗体，不利于抗体的回收和保存；加上遇到溶解不充分和洗涤不干净，容易增加背景、拮抗抗原抗体结合，且不能用于磷酸化蛋白。

     2、TBST

      TBST 是Tris缓冲液，也是实验室常用的抗体稀释液，对于初次使用抗体时，TBST更安心。效价高的抗体会看到漂亮的条带，效价差的一抗或多抗，会清晰反映出非特异性结合条带，背景高，不能起到降低背景的作用。

     3、PBST

     PBS是磷酸盐缓冲液，不能用来稀释碱性磷酸酶（AP）标记的抗体，因为磷酸盐会抑制碱性磷酸酶活性。注：含AP标记的二抗不能使用PBST稀释。

     4、BSA

     牛血清白蛋白(BSA) 是牛血清的一种球蛋白。价格较高，一般有条件的实验室使用，BSA能起到封闭效果，减少抗体的非特异性结合。但售卖的BSA通常会有少量的抗体残留，会导致抗原/抗体之间的交叉反应，产生背景。

     5、市售的抗体稀释液

      市售的一抗或二抗稀释液，通常是经过不断优化的BSA，为保证稳定性会增加叠氮钠，但叠氮钠不能用来稀释辣根过氧化酶 (HRP)标记的抗体，因为叠氮钠会抑制HRP的活性，并且还含有毒性，影响人体健康。

抗体选择和稀释比度

      每个实验室的样本来源、处理方法、实验方案各不相同，对抗体要求也可能不同。

       2.确定抗体稀释浓度  

       3. 确定抗体使用量      

      ✎WB：稀释比1:1000

       例如：一块胶，跑10个样本

       剪膜：所需一抗量（工作液）2-3ml  抗体原液2-3ul

       整膜：所需一抗量（工作液）10ml 抗体原液10ul

    ✎IHC：稀释比 1:50-1:200

       例如：一张切片的抗体使用量

       根据组织块的大小，一张切片使用量100ul，即抗体原液需要0.5ul-2ul

       *建议使用CST推荐的辅助试剂 尤其是一抗稀释液和二抗

    ✎Flow：一个样本，100ul稀释后的一抗，根据稀释比例，一般需要1-2ul一抗原液。

    ✎IP：稀释比1:50

     例如：CST推荐一个样本200ul，1ug/ul

     那一个样本需要4ul一抗原液(直接将一抗加入到样本）

     ✎CHIP：为了获得最佳的ChIP和ChIP-seg结果， 每次免疫沉淀使用20μ抗体和10 μg染色质(大约4x10^6个细胞) 。

     需要注意的是，这里的抗体用量计算只是一个粗略的估计，请您一定要根据自己的实验情况来进行完善，并留出一定的余量来防止抗体量不够而耽误后续实验。

驰恩推荐产品

     一、WB专用一抗二抗稀释液

      WB专用一抗二抗稀释液适用于蛋白印迹时一抗和二抗的稀释和配制。稀释液中添加了多种抗体保护剂，可以增加抗体的活性和稳定性，减少抗体的非特异性结合，降低非特异性的背景着色，提高试验的特异性和灵敏度。

       二、IHC稀释液

       三、ELISA稀释液